CLONING OF VIETNAM DANG SAM
(CODONOPSIS JAVANICA (BLUME) HOOK. F. ET THOMS.) IN VITRO
Doan Trong Duc1,*, Tran Van Minh2
1Kontum Center for Scientific Applications and Technological Transfer
2International University, VNU-HCM
*Corresponding author: trongduckt@yahoo.com
(Nhận bài ngày 05 tháng 12 năm 2014)
Tóm tắt
Dòng hóa cây đảng sâm Việt Nam (Codonopsis javanica (Blume) Hook. f. et Thoms.) in vitro
Mẫu nuôi cấy là đốt thân được khử trùng bằng HgCl2 0,1 % trong 5 phút đạt hiệu suất vô trùng 58,3 %. Môi trường nuôi cấy MS có bổ sung 2,4D 2 mg/l và TDZ 0,1 mg/l thích hợp cho sự tạo mô sẹo trên bề mắt cắt của đốt thân sau 30 ngày nuôi cấy. Mô sẹo được nuôi cấy tăng sinh trên môi trường MS1/2 có bổ sung 2,4D 2 mg/l và TDZ 0,1 mg/l sau 8 tuần nuôi cấy. Khối mô sẹo có đường kính 5 mm được nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung BA 2 mg/l và NAA 0,5 mg/l phát sinh cụm chồi sau 60 ngày nuôi cấy. Cụm chồi được phân chia thành cụm chồi nhỏ có đường kính 5 mm và 3-5 chồi/cụm. Cụm chồi nhỏ được nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung BA 2 mg/l and NAA 0,5 mg/l cho phát sinh nhiều chồi mới và chồi phát triển lớn hơn sau 20 ngày nuôi cấy. Chồi được cắt thành đốt có 2 lá và được nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung BA 0,5 mg/l and IBA 0,7 mg/l tái sinh thành cây hoàn chỉnh có 4-5 lá, 6-10 rễ, rễ dài 4-6 cm đạt tỷ lệ sống 85,07 % chuẩn bị đưa ra môi trường thuần hóa. Cát là cơ chất thích hợp cho thuần hóa 10 ngày đầu tiên sau ống nghiệm và đất trộn thích hợp cho cây con sinh trưởng và phát triển sau đó.
Từ khóa: Thuần hóa, Mô sẹo, Cụm chồi, Tái sinh, Khử trùng.
Summary
Cloning of Vietnam Dang Sam (Codonopsis javanica (Blume) Hook. f. et Thoms.) in vitro
Sterilization of Vietnam dang sam (Codonopsis javanica (Blume) Hook. f. et Thoms.) cutting explants by HgCl2 0.1 % in 5 minutes reach 58.3 % survivals. The MS medium supplemented with 2.4D 2 mg/l and TDZ 0.1 mg/l was favored for callus induction on cutting surface after 30 days. Callus was proliferated on MS-1/2 medium supplemented with 2.4D 2 mg/l and TDZ 0.1 mg/l after 8 weeks. Callus cluster of 5 mm diameter were regenerated on MS medium supplemented with BA 2 mg/l and NAA 0.5 mg/L initiated multiple shoots after 60 days. Multiple shoots were divided into shoot clusters having diameter of 5 mm with 3-5 shoots/cluster. Shoot clusters were cultured on multiplication medium of MS supplemented with BA 2 mg/l and NAA 0.5 mg/l initiated to new shoots and the shoots were bigger after 20 days. Shoots were divided into 1 cm length cuttings with 2 leaves and cultured on MS medium supplemented with BA 0.5 mg/l and IBA 0.7 mg/l for regeneration to whole plantlets having 4-5 leaves, 6-10 roots, 4-6 cm root length reaching survivals of 85.07 % and being ready for acclimatization environment. Sand substrate was favored for acclimatization in the first 10 days of ex vitro culture and mix-soil substrate was favored for plantlet growth and development afterward.
Keywords: Acclimatization, Callus, Multiple shoots, Regeneration, Sterilization.
(Nguồn tin: )